خریدار گرامی شما میتوانید فایل (مواد و روشها) را ویرایش کنید.

مواد و روشها - word (..doc) - دانلود,مقاله,مواد,و,روشها,دانلود

قسمتی از متن :

46

‏3- 1-‏ مواد گياهي

‏ ‏ا‏رق‏ا‏م مورد استفاده در اين آزمايش‏2‏ رقم ‏گلوبال ‏ ‏وآپشن ‏از تيپ‏های‏ بهاره‏ ودوصفر‏ ‏می باشند‏ و در چند سال اخير ‏کشت آنها‏ در ايران ‏رایج شده است‏.

‏3- 2‏- ‏كشت بذور

‏بذور کلزا در داخل گلدانهايي با قطر cm‏25‏ كشت گرديدند. خاك مورد استفاده شامل دو قسمت خاك معمولي، يك قسمت خاك برگ، يك قسمت كود دامي، يك قسمت ماسه بود. در داخل هر گلدان ‏5 الي 6 ‏ب‏ذ‏ر در قسمتهاي مختلف گلدان كشت گرديد و گلدانها پس از كشت بذور در داخل اتاق‏ک‏ رشد گروه اصلاح نباتات ‏سازمان انرژی اتمی بخش‏ كشاورزي‏ هسته ای‏ قرار گرفتند. دو هفته پس از سبز شدن بذور و اطمينان از رشد گياهچه‏‌‏ها، در هر گلدان ‏2‏ بوته حفظ گرديده و بقيه حذف شدند.

‏3- 3‏-‏ شرايط اتاق رشدin vivo

‏نور ‏اتاق رشدي كه گلدانها در آن قرار داشتند ‏با‏ ‏6‏ لامپ ‏400‏ وات بخار سديم تأمين مي ‏شد لامپها‏ در ارتفاع ‏4/1‏ متري از سطح گلدانها قرار داشتند و شدت نور در اتاق رشد ‏30000‏ لوكس بود. از لحاظ فتوپري‏و‏دي‏ اتاق رشد‏ روي ‏8/‏16‏ ‏ساعت تاريكي و‏ ‏روشنائی‏ و دماي‏ روز و‏ ‏شب°C‏10‏/‏ °C‏15‏ ‏تنظيم ‏شده بود.

‏3‏-‏ 4-‏ مراقبت‏‌‏هاي زراعي

‏مراقبت‏‌‏هاي زراعي، شامل آبياري، سم پاشي، محلول پاشي بود.‏ ‏برنامة آبياري هر سه روز يكبار انجام‏ ‏گرفت. از نظر كنترل آفات و بيماريها يكي از آفاتي كه به وفور در ‏فیتوترون‏ ديده ‏‌‏شد شته بود كه جهت دفع آنها از ديازينون ‏2/1‏ در هزار و متاسيستوكس ‏1‏ در هزار استفاده گرديد و برنامة سم پاشي در هر دورة رشد گياهان ‏2‏ مرتبه انجام گرفت. يكي از كارهايي كه جهت جلوگيري از شيوع آفات و بيماريها انجام گرفت حذف برگهاي زرد و مرده‏ در قسمت تحتاني گياه‏ بود كه‏ در‏ هر هفته‏ يك بار‏ اين عمل انجام ‏‌‏گرفت.به منظور تقويت گياهان مادری از كودهاي مغذي

47

‏ كامل‏ استفاده گرديد كه اين كود به صورت محلول پاشي هر دو هفته يكبار روي برگ گياهان اسپري‏ ‏شد.

‏3- ‏5-‏ برداشت غنچه‏‌‏ها و تعيين مرحلة مناسب ميكروسپورها جهت جنين‏‌‏زايي

‏گياهان كلزا‏ی بهاره‏ پس از ‏35‏ ـ ‏45‏ روز از كشت به تدريج شروع به غنچه‏‌‏دهي كردند كه به منظور تعيين مرحلة مناسب ميكروسپورها جهت جنين‏‌‏زايي، يك آزمايش سيتولوژيكي روي غنچه‏‌‏ها انجام گرفت. ‏ بدين ترتيب كه غنچه هايي با اندازه‏‌‏هاي مختلف ‏2-1، 3-2، 4-3، 5-4 و‏ ‏6-5 ‏ميليمتر از گياهان مختلف به طور تصادفي انتخاب شدند. پس از انتخاب غنچه‏‌‏ها با اندازه‏‌‏هاي فوق،‏ ‏از هر غنچه يك پرچم‏ ‏با پنس برداشته شد و‏ ‏روي لام قرار داده شد. سپس يك قطره استوكارمن ‏2%‏ به آن اضافه گرديد و با نوك سوزن پرچم را‏ ‏له كرده و ديواره و قسمتهاي اضافي پرچم حذف گرديد. سپس يك لامل روي آن قرار داده شد.‏ و‏ پس از تهية نمونه از غنچه ها با اندازه هاي مختلف، نمونه‏‌‏ها در زير ميكروسكوپ از نظر سيتولوژيكي بررسي شدند و مرحلة ميكروسپور در هر نمونه تعيين گرديد.

‏3‏- ‏6‏-‏ ‏محيط‏‌‏هاي ك‏شت، ايزولاسيون و باززايي در كشت ‏ميكروسپورهای كلزا

‏3‏- ‏6- 1-‏ محيط ايزولاسيون ميكرو‏س‏پورها

‏محيط جداسازي يا استخراج ميكروسپورها ميكروسپورها را از ساير قسمت‏‌‏هاي غنچه كه طي آسياب شدن ايجاد مي‏‌‏شوند، جدا مي‏‌‏كند.محيط استخراج ميكروسپورها در اين آزمايش طبق يک پروتکل کانادايي تهيه گرديد..(Fletcher et al., 1998)‏ براي تهي‏ة‏ اين محيط ‏جداسازي‏ g‏130‏ ساكاروز در داخل ‏1‏ ليتر آب حل گرديد وpH ‏ محلول حاصل روي ‏6pH=‏ تنظيم گرديد. و پس از تهية آن به مقدارml ‏150‏ در هر ‏ارلن‏ توزيع ‏کرده‏ و جهت استريل شدن در اتوكلا و با دماي °C‏121‏ و فشار ‏2/1‏ بار قرار گرفتند.محيط ايزولاسيون ميكروسپورها پس از اتوكلاو شدن در دماي°C‏4 ‏، در داخل يخچال نگهداري شدند.

‏3‏- ‏6- 2- محيط‏ كشت ميكروسپورها

‏محيط كشت مورد استفاده در اين آزمايش(Kott., 1998) NLN-13 ‏ مي باشد كه ميكروسپورهاي استخراج شده در اين محيط كشت مي‏‌‏گردند. به منظور تهية محيط كشت‏ NLN-13‏ طبق پروتكل از محلولهاي مادري تهيه شده به مقدار مورد نياز برداشته شد و سپس

تصاویری از چند صفحه نخست فایل :

توجه فرمایید بدلیل تهیه ی تصویر با نرم افزار های خارجی متن نمایش داده شده در تصاویر ممکن است دارای اشکالاتی در نمایش برخی حروف باشد که در فایل اصلی بدون مشکل است